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【方法】無塵車間污染控制范圍 無塵無菌室的檢驗流程方法

1、控制人員散發的污染 人員的鼻腔、口腔、皮膚、頭發和身上的服裝都散發污染物。控制人員散發的污染，首先是控制進入無塵車間的人員數量。與生產、科研無直接關系，未經無塵車間工作人員守則培訓的人員，一律不得進入無塵車間。進入的人員要遵循無塵車間工作守則，整齊穿著潔凈工作服，戴工作手套、口罩、頭套，穿凈化鞋，經潔凈通道進入。

對進出無塵車間人員要嚴格管理，例如不允許進入無塵車間工作時使用化妝品，定期洗澡，在無塵車間中不允許戴手表及首飾，進入無塵車間前幾小時內不宜吸煙，禁止攜帶私人物品進入無塵車間等。除盡可能降低人員散發的污染物外，空調凈化送風的氣流也是有效稀釋、疏導并排出人員散發的污染物的重要手段。例如人員行走的通道是散發污染物的主要位置，在該處設置回、排風口，使其處于室內下風向，以盡可能減少人員所散發的污染物擴散到無塵車間的其它區域。又如關鍵工序部位設置在無塵車間中非操作人員不易到達之處無塵車間，無塵車間污染控制范圍以減少額外的人員污染。

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1.無菌室應設有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應達到10000級，室內溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%。超潔凈工作臺潔凈度應達到100級。

2.無菌室應保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。

3.嚴防一切滅菌器材和培養基污染，已污染者應停止使用。

4.無菌室應備有工作濃度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液，等等。

5.無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。

6.需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應包扎嚴密，并應經過適宜的方法滅菌。

7.工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作。

8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開超凈臺進行吹風。操作完畢，應及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。

9.供試品在檢查前，應保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作過程中，均應

做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。

11.吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

12.接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養物。

13.帶有菌液的吸管，試管，培養皿等器皿應浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內消毒，24小時后取出沖洗。

14.如有菌液灑在桌上或地上，應立即用5%石碳酸溶液或3％的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。

15.凡帶有活菌的物品，必須經消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴禁污染下水道。

16.無菌室應每月檢查菌落數。在超凈工作臺開啟的狀態下，取內徑90mm的無菌培養皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養瓊脂培養基約15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培養箱培養48小時，證明無菌后，取平板3～5個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養箱培養48小時，取出檢查。100級潔凈區平板雜菌數平均不得超過1個菌落，10000級潔凈室平均不得超過3個菌落。如超過限度，應對無菌室進行徹底消毒，直至重復檢查合乎要求為止。

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